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　　以下是天津本生技術(shù)小編關(guān)于人T細(xì)胞生長(zhǎng)因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明綜合整理：

　　BS-0292人T細(xì)胞生長(zhǎng)因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體夾心法：包被抗體與樣本中TCGF-Ⅲ結(jié)合后，再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成復(fù)合物，通過(guò)TMB顯色反應(yīng)(藍(lán)色→黃色)測(cè)定OD值，顏色深度與TCGF-Ⅲ濃度呈正相關(guān)。

　　二、試劑盒組成

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：2700ng/L(0.5ml/瓶)

　　酶標(biāo)包被板?：48孔或96孔規(guī)格

　　檢測(cè)抗體?：HRP標(biāo)記抗體(3ml/48T或6ml/96T)

　　底物系統(tǒng)?：顯色劑A/B液各50μL/孔

　　終止液?：50μL/孔

　　20×洗滌緩沖液?：需1:20稀釋

　　三、樣本處理

　　血清?：室溫靜置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后離心(1000g, 20分鐘)

　　血漿?：EDTA/肝素抗凝，采集后30分鐘內(nèi)離心(2-8°C, 1000g, 20分鐘)

　　細(xì)胞上清?：直接離心(1000g, 20分鐘)

　　注：避免反復(fù)凍融及溶血樣本

　　四、操作步驟

　　平衡試劑?：取出試劑盒室溫平衡20分鐘

　　加樣?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔：50μL梯度標(biāo)準(zhǔn)品

　　樣本孔：10μL樣本+40μL稀釋液

　　孵育?：加入HRP檢測(cè)抗體100μL，37℃孵育60分鐘

　　洗滌?：用洗滌液洗板5次，每次靜置1分鐘

　　顯色?：每孔加底物A/B各50μL，37℃避光孵育15分鐘

　　終止與檢測(cè)?：加終止液50μL，15分鐘內(nèi)測(cè)450nm OD值

　　五、注意事項(xiàng)

　　溫育需嚴(yán)格控制時(shí)間與溫度(37±1℃)

　　顯色過(guò)淺可延長(zhǎng)底物孵育時(shí)間

　　開封后未用完板條需密封保存(4℃+干燥劑)

　　推薦做雙份檢測(cè)以減少誤差

　　六、適用儀器

　　酶標(biāo)儀(450nm)

　　精密加樣器(0.5-1000μL范圍)

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